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Qualité de vie - Santé - Aliments
I2BC / Plateforme de mesures d'Interactions Macromoléculaires (PIM)
Plateforme technologique
La Plateforme de mesures d'Interactions Macromoléculaires (PIM) de l'I2BC offre un large éventail d'équipements et d'expertises en biochimie et biophysique pour réaliser des mesures de contrôles qualités ainsi que des analyses fonctionnelles d'échantillons de protéines : microcalorimétrie, ultracentrifugation analytique (UCA), MST, SEC-RALS-LALS, BLI, SPR, switchSENSE.
Les prestations offertes par la plateforme concernent : 1) La caractérisation biophysique de protéines ou de complexes biologiques (SEC-RALS-LALS, UCA), 2) L'analyse d'interactions biologiques (ITC, SPR, BLI, switchSENSE, MST), 3) L'analyse de la stabilité des macromolécules et des complexes biologiques pour notamment aider à la formulation (DSC, DSF). En complément, 4) Une nouvelle activité est proposée sur la plateforme : La génération et production de protéines artificielles (αRep) qui fixent avec une affinité et une spécificité élevée n'importe quelle protéine cible choisie.
Les appareils et prestations sont mis à disposition de l'ensemble des laboratoires de l'Université Paris-Saclay, des autres laboratoires académiques ainsi qu'aux industriels.
Pour plus d'informations concernant ces prestations : stephanie.marsin@i2bc.paris-saclay.fr.
Cette plateforme fait partie du pôle des plateformes de Biologie Structurale de l'I2BC qui comprend : i) les plateformes de Cristallisation, RMN, CryoEM, Mesures d'Interactions Macromoléculaires, et ii) les plateaux techniques d'Expression de protéines solubles ou membranaires en levures, Expression des protéines en cellules d'insectes.
- Mme Magali AUMONT-NICAISE
- Mme Stéphanie MARSIN
- Mme Magali NOIRAY
Thématiques d'innovation
Laboratoire de rattachement
15, rue Georges Clémenceau
I2BC, site d'Orsay, Faculté des Sciences de Paris-Sud
91450 ORSAY
Technologies utilisées
1) La caractérisation biophysique de protéines ou de complexes biologiques :- SEC-MALS (Wyatt Technology) : détermination de la masse molaire et de la st?chiométrie de complexes protéiques, protéine/détergent, protéine/acide nucléique, protéine/glycosylation. Détermination du rayon hydrodynamique des espèces éluées. Détermination du Kd d'un complexe dimérique en équilibre rapide avec la forme monomérique.
- UCA, Optima XL-I et Détecteur de fluorescence (Beckman) : détermination de paramètres biophysiques (coefficient de sédimentation, masse molaire), de constantes de dissociation (pour des Kd compris entre le pM et le mM), de la st?chiométrie et du taux d'agrégation
2) L'analyse d'interactions biologiques :
- ITC200 et VP-ITC (Malvern) : mesures d'interactions protéine-protéine, protéine-ADN, protéine-ligand? permettant de déterminer les paramètres liés à l'interaction (st?chiométrie, KD, deltaH)
- Switch Sense (Dynamic Biosensors) : mesures d'interactions entre molécules (protéine/ADN, protéine/protéine) permettant de déterminer les paramètres cinétiques de l'interaction (Kon et Koff) et de calculer le KD. Mesures de la taille/ conformation (DH) d'une protéine ou d'un complexe macromoléculaire.
- MST Monolith NT.115 (NanoTemper) : mesures d'interaction qui fournit des informations sur les constantes d'affinité (KD), avec de faibles quantités d'échantillon et ceci pour une gamme d'affinités se situant entre le nM et le mM.
3) L'analyse de la stabilité des macromolécules et des complexes biologiques, dont aide à la formulation :
- Auto PEAQ DSC et VP-DSC (Malvern) : mesures de la stabilité de protéines, de complexes protéiques, aide à la formulation. Technique permettant de déterminer les différents paramètres thermodynamiques (Tonset, Tm, deltaHcal, deltaHVH).
- TSA / DSF (Applied Biosystem) : détermination de la dénaturation thermique des protéines par la mesure de variation de fluorescence du SYPRO orange.
- Tycho (Nanotemper) : utilisé en contrôle qualité des protéines : détermination de la dénaturation thermique des protéines suivi par la variation de fluorescence intrinsèque (tryptophane et tyrosine)
Mots clés
Equipements spécifiques
| Nom | Modèle | Marque |
|---|---|---|
| Chromatographie phase liquide SEC-MALS (détecteur) | miniDAWN TREOS et T-rEX/ | Wyatt Technology |
| Chromatographie phase liquide SEC-MALS (HPLC) | HPLC/ | Shimadzu |
| Contrôle Qualité des protéines (Tycho) | Tycho NT.6/ | NanoTemper |
| Microcalorimètre à balayage (DSC) | auto PEAQ DSC et VP-DSC/ | MicroCal (Malvern) |
| Microcalorimètre isotherme (ITC) | VP-ITC, ITC200 et PEAQ ITC/ | MicroCal (Malvern) |
| Microscale Thermophoresis | Monolith NT.115/ | NanoTemper Technologies |
| Switch SENSE | DRX2/ | Dynamic Biosensors |
| Thermal shift assay | StepOne plus/ | Applied Biosystems |
| UHPLC-Orbitrap Fusion | Optima ProteomeLab/ | Beckman |
Offres de formations
Département(s) de recherche
- SDV (Sciences de la vie)